卸妆油皮肤刺激性斑贴试验技术规范：从动物模型到人体评价的全流程风险评估

卸妆油皮肤刺激性斑贴试验技术规范：从动物模型到人体评价的全流程风险评估

一、试验设计与受试物制备

（一）受试物浓度与对照组设置

受试物处理：

1.原液组：未稀释卸妆油（含油脂、表面活性剂及防腐剂）；

2.稀释组：50%卸妆油（去离子水按1:1体积比稀释），评估浓度依赖性刺激；

3.阳性对照：0.5%十二烷基硫酸钠（SDS）水溶液（已知中度刺激）；

4.阴性对照：去离子水（无刺激性）12。

赋形剂与贴片选择：

1.贴片类型：无纺布圆形贴片（直径8 mm，面积0.5 cm²），每片负载0.2 mL受试物；

2.固定方式：低致敏医用胶带（3M Micropore），避免胶带直接接触皮肤引发刺激；

3.封闭性：使用铝箔覆盖贴片（封闭式斑贴），确保受试物与皮肤充分接触3。

（二）动物模型与人体志愿者选择

动物模型：

1.物种：新西兰白兔（雌性，体重2.0-2.5 kg），每组3只；

2.皮肤准备：背部脱毛（面积5 cm×10 cm），脱毛后24小时检查皮肤完整性（无划痕、红斑）；

3.适应期：实验室环境适应5天（温度23±2℃，湿度50±10%）4。

1.纳入标准：18-65岁健康成人，皮肤类型Ⅰ-Ⅳ型（Fitzpatrick分类），近3个月未使用糖皮质激素；

2.排除标准：敏感肌、特应性皮炎史、妊娠哺乳期女性，样本量≥20人（满足统计学要求）5。

二、标准操作流程与观察指标

（一）动物斑贴试验步骤

贴片施加：

1.每只兔背部对称放置4个贴片（原液、稀释液、阳性对照、阴性对照），间距≥2 cm；

2.轻压贴片确保无气泡，使用弹性绷带固定，防止动物抓挠。

暴露与移除：

1.暴露时间：24小时；

2.移除后处理：用温水轻柔清洗残留受试物，避免摩擦刺激；

3.观察时间点：移除后30分钟（急性反应）、24小时、48小时、72小时（延迟反应）2。

（二）Draize评分体系

反应类型评分标准（动物模型）评分标准（人体模型）

红斑无（0）、轻微可见（1）、中度（2）、重度（3）、焦痂（4）无（0）、轻微（1）、明显（2）、重度（3）

水肿无（0）、轻微（1）、中度（2）、重度（3）无（0）、轻微（1）、明显（2）、重度（3）

总分红斑分+水肿分（最高7分）原发性刺激指数（PSI）=（红斑发生率+水肿发生率）/2

（三）人体斑贴特殊观察指标

1.主观症状：瘙痒、灼热感（视觉模拟评分法VAS 0-10分）；

2.皮肤反应持续时间：记录红斑/水肿消退时间，超过72小时提示潜在慢性刺激；

3.重复激发试验：对弱阳性结果（PSI 0.5-1.9）者，2周后再次贴片确认反应重现性5。

三、结果判定与风险分级

（一）刺激强度分级标准

动物试验总分（Draize）人体PSI值刺激强度风险等级

0-0.4＜0.5无刺激低风险

0.5-1.90.5-1.9轻度刺激中风险

2.0-4.92.0-3.9中度刺激高风险

≥5.0≥4.0重度刺激ji高风险

（二）体外替代试验验证

EpiDerm™重组人表皮模型：

1.操作步骤：受试物暴露15分钟→PBS清洗→MTT染色→检测570 nm吸光度；

2.判定标准：相对细胞活力≥50%为无刺激，与动物试验结果一致性85%6。

3D皮肤模型优势：

无需动物伦理审批，试验周期缩短至48小时，可评估香精、防腐剂等成分的协同刺激作用7。

四、影响因素与试验优化

（一）关键影响因素

1.皮肤完整性：动物脱毛时避免刮伤（可采用化学脱毛剂硫化钠，浓度8%）；

2.贴片停留时间：人体模型48小时暴露比24小时更易检出延迟性刺激（如甲醛释放体）；

3.环境湿度：高湿度（＞60%）可能增强水溶性成分的渗透，建议控制在50±5%3。

（二）配方优化建议

刺激性成分替代：用苯氧乙醇（≤1%）替代甲基异噻唑啉酮，降低防腐剂刺激风险；

油脂体系调整：增加霍霍巴油（20%-30%）可缓解表面活性剂对皮肤屏障的破坏；

pH值控制：调节至5.5-7.0（接近皮肤pH），减少酸碱刺激1。

五、法规要求与报告撰写

（一）法规依据

中国：《化妆品安全技术规范》（2022年版）第四章皮肤刺激性/腐蚀性试验；

欧盟：EC 1223/2009法规，要求对新原料进行体外替代试验；

美国：FDA化妆品自愿注册计划（VCRP）

（二）报告核心内容

1.受试物信息（成分、浓度、批号）；

2.试验设计（模型选择、样本量、对照组）；

3.原始数据（红斑/水肿照片、评分记录）；

4.结论与建议（如“本品为轻度刺激，建议添加舒缓成分"）。

关键词：卸妆油；皮肤刺激性；斑贴试验；Draize评分；重组人表皮模型

参考文献

[1] 《化妆品安全技术规范》（2022年版）[S]. 国家药监局.

[2] OECD Test No. 404 皮肤刺激性/腐蚀性试验[S]. 2015.

[3] SCCS Guidance on Dermal Irritation Testing[S]. 2021.