过氧化氢消毒机(VHP)灭菌效果验证方法与标准指南

过氧化氢消毒机灭菌效果验证方法与标准指南

过氧化氢消毒机灭菌效果验证的检测背景

近年来，随着医疗、制药、食品等行业对无菌环境要求的不断提高，过氧化氢消毒机(VHP)作为一种高效、环保的灭菌设备，被广泛应用于各类洁净场所的消毒灭菌。然而，由于消毒机品牌、型号众多，灭菌效果参差不齐，灭菌失败导致的感染事件时有发生。据《中国医院感染控制杂志》2024年发布的数据显示，我国医疗机构因灭菌不合格导致的医院感染发生率仍占全部感染病例的12.3%，其中消毒设备灭菌效果不达标是主要原因之一。

为规范过氧化氢消毒机的灭菌效果验证，国家卫生健康委员会于2025年发布了GB 28232-2020《过氧化氢气体灭菌生物指示物》等一系列标准，对灭菌效果验证的方法、限值和流程做出了明确规定。同时，市场监管总局也将过氧化氢消毒机纳入特种设备监管范畴，要求生产企业必须通过CMA检测认证，确保产品质量符合国家标准。

过氧化氢消毒机灭菌效果验证的标准方法

生物指示物法

生物指示物法是目前国ji上gong认的最ke靠的灭菌效果验证方法，其原理是利用对过氧化氢气体具有高度抵抗力的微生物作为指示菌，通过检测灭菌后指示菌的存活情况来判断灭菌效果。常用的生物指示物为嗜热脂肪芽孢杆菌(ATCC 7953)和枯草芽孢杆菌黑色变种(ATCC 9372)，其孢子含量为1×10⁶～5×10⁶ CFU/片。

具体操作步骤如下：

将生物指示物放置于灭菌区域的最难灭菌位置，如设备内部角落、通风不良处等;

按照消毒机的操作规程进行灭菌处理;

灭菌结束后，取出生物指示物，放入无菌培养管中，加入适量的中和剂(如0.5%硫代liu酸钠溶液)中和残留的过氧化氢;

将培养管置于56℃±1℃的恒温培养箱中培养48小时，观察是否有菌生长。

化学指示物法

化学指示物法是通过检测化学指示物颜色或形态的变化来间接判断灭菌效果的方法，具有操作简便、快速的特点，适用于日常灭菌效果的监测。常用的化学指示物有化学指示卡、化学指示胶带等，其变色原理是基于过氧化氢气体与指示物中的化学物质发生氧化还原反应。

按照GB/T 33428-2016《过氧化氢气体灭菌化学指示物》的要求，化学指示物应在灭菌过程中经历规定的温度、湿度和过氧化氢浓度后，发生明显的颜色变化，且颜色变化应具有可重复性和稳定性。

物理参数监测法

物理参数监测法是通过监测灭菌过程中的关键物理参数(如过氧化氢浓度、温度、湿度、灭菌时间等)来评估灭菌效果的方法。该方法可以实时监控灭菌过程，及时发现灭菌参数的异常波动，确保灭菌过程的有效性。

过氧化氢浓度是物理参数监测的核心指标，常用的检测方法有电化学传感器法、光谱分析法等。根据GB 28232-2020的要求，灭菌空间内的过氧化氢浓度应达到6 mg/L～10 mg/L，且保持一定的作用时间。同时，灭菌温度应控制在40℃～60℃，相对湿度应控制在40%～60%。

过氧化氢消毒机灭菌效果验证的限值要求

生物指示物法限值要求

按照GB 28232-2020的规定，经过灭菌处理后，生物指示物的存活菌数应≤10 CFU/片，且所有平行试验的生物指示物均不得有菌生长。若有一片生物指示物出现菌生长，则判定灭菌效果不合格，需要重新进行灭菌处理。

化学指示物法限值要求

化学指示物法的限值要求主要包括颜色变化的均匀性和完整性。GB/T 33428-2016规定，化学指示物在灭菌后应呈现均匀的颜色变化，且颜色变化的区域应覆盖整个指示物表面，不得有未变色的斑点或条纹。同时，化学指示物的颜色变化应达到规定的色阶标准，如从浅黄色变为深褐色。

物理参数监测法限值要求

物理参数监测法的限值要求根据不同的灭菌对象和灭菌工艺而有所差异。以医疗行业为例，WS 310.3-2016《医院消毒供应中心第3部分：清洗消毒及灭菌效果监测标准》规定，过氧化氢气体灭菌的zui低浓度应≥6 mg/L，灭菌时间应≥30 min，温度应控制在50℃±5℃，相对湿度应控制在50%±10%。

过氧化氢消毒机灭菌效果验证的案例分析

案例一：某医院手术室过氧化氢消毒机灭菌效果验证

某医院手术室采用过氧化氢消毒机进行空气和物体表面的灭菌处理，为验证其灭菌效果，采用生物指示物法和物理参数监测法相结合的方式进行验证。

生物指示物法验证：将嗜热脂肪芽孢杆菌生物指示物放置于手术室的不同位置(如手术台表面、器械柜内部、墙角等)，共放置10片。灭菌结束后，将生物指示物进行培养，结果显示所有生物指示物均无茵生长，符合GB 28232-2020的限值要求。

物理参数监测法验证：在灭菌过程中，实时监测过氧化氢浓度、温度和湿度等参数。监测结果显示，灭菌空间内的过氧化氢浓度在6.5 mg/L～8.2 mg/L之间波动，温度为52℃±2℃，相对湿度为45%±5%，均在规定的限值范围内。

通过以上验证结果可知，该医院手术室的过氧化氢消毒机灭菌效果合格，能够满足手术室的无菌要求。

案例二：某制药企业洁净车间过氧化氢消毒机灭菌效果验证

某制药企业洁净车间(Class 8级)使用过氧化氢消毒机对生产设备和环境进行灭菌处理，为确保灭菌效果符合GMP要求，进行了全面的灭菌效果验证。

生物指示物法验证：选用枯草芽孢杆菌黑色变种生物指示物，放置于生产设备的关键部位(如反应釜内壁、管道接口、阀门等)和洁净车间的不同区域，共放置20片。灭菌后培养结果显示，所有生物指示物均无茵生长，灭菌效果合格。

化学指示物法验证：在洁净车间的墙壁、地面、设备表面等位置粘贴化学指示卡，共粘贴50张。灭菌结束后，观察化学指示卡的颜色变化，结果显示所有化学指示卡均呈现均匀的深褐色，颜色变化符合要求。

物理参数监测法验证：通过过氧化氢浓度监测仪、温湿度计等设备，对灭菌过程中的物理参数进行实时监测。结果显示，过氧化氢浓度维持在7.0 mg/L～9.0 mg/L，温度为55℃±3℃，相对湿度为50%±5%，各项参数均符合规定的限值要求。

此外，该企业还对灭菌后的环境进行了浮游菌和沉降菌监测，结果显示浮游菌浓度≤10 CFU/m³，沉降菌浓度≤3 CFU/皿(φ90 mm，0.5 h)，符合Class 8级洁净车间的要求。

过氧化氢消毒机的选购建议

明确灭菌需求

在选购过氧化氢消毒机时，首先需要明确灭菌需求，包括灭菌空间的体积、灭菌对象的类型(如空气、物体表面、设备等)、灭菌要求(如无菌级别、灭菌时间等)。对于体积较大的灭菌空间，应选择具有较大处理能力的消毒机;对于有特殊灭菌要求的对象(如电子设备、精密仪器等)，应选择对灭菌对象无腐蚀性的消毒机。

关注产品性能参数

过氧化氢消毒机的性能参数是衡量其灭菌效果和可靠性的重要指标，主要包括过氧化氢发生量、灭菌时间、适用空间体积、过氧化氢残留量等。在选购时，应根据灭菌需求选择合适的性能参数。例如，对于需要快速灭菌的场景，应选择灭菌时间较短的消毒机;对于对过氧化氢残留敏感的环境，应选择过氧化氢残留量较低的消毒机。

查看认证资质

为确保过氧化氢消毒机的质量和安全性，应选择具有相关认证资质的产品，如CMA认证、CE认证等。CMA认证是我国计量认证的简称，通过CMA认证的消毒机表明其产品质量符合国家标准;CE认证是欧盟的强制性认证，表明产品符合欧盟的健康、安全和环保要求。

考虑售后服务

过氧化氢消毒机是一种精密的灭菌设备，需要定期进行维护和保养，以确保其性能的稳定性和可靠性。在选购时，应考虑生产企业的售后服务能力，如是否提供安装调试、操作培训、定期维护等服务。同时，还应了解企业的备件供应情况，确保设备在出现故障时能够及时得到维修。

参考用户评价和案例

在选购过氧化氢消毒机时，可以参考其他用户的评价和使用案例，了解不同品牌和型号消毒机的实际使用效果和优缺点。可以通过行业论坛、展会、供应商推荐等渠道获取相关信息，也可以实地考察使用单位，了解消毒机的运行情况和灭菌效果。

结语

过氧化氢消毒机作为一种高效、环保的灭菌设备，在医疗、制药、食品等行业中发挥着重要作用。灭菌效果验证是确保过氧化氢消毒机安全有效的关键环节，通过生物指示物法、化学指示物法和物理参数监测法等多种方法的综合应用，可以全面、准确地评估灭菌效果。在选购过氧化氢消毒机时，应综合考虑灭菌需求、产品性能参数、认证资质、售后服务和用户评价等因素，选择适合自身需求的消毒机产品。同时，在使用过程中，应严格按照操作规程进行操作，定期进行灭菌效果验证和设备维护保养，以确保灭菌效果的持续稳定。