宠物清洁护理剂中防腐剂含量的高效液相色谱测定方法

宠物清洁护理剂中防腐剂含量的高效液相色谱测定方法  

一、检测意义与方法原理  

宠物清洁护理剂中常用防腐剂包括苯氧乙醇、山梨酸钾、甲基异噻唑啉酮等，这些成分在有效抑制微生物生长的同时，若过量添加可能引发宠物皮肤过敏或接触性皮炎。高效液相色谱法（HPLC）通过保留时间定性和峰面积定量，可实现对多种防腐剂的快速分离与准确测定，具有分离效率高、重现性好的特点，适用于宠物清洁产品的质量控制。  

二、实验方法与步骤  

1.样品前处理  

称取5.000g宠物清洁护理剂样品（如沐浴露、湿巾提取液）于50mL离心管中，加入20mL甲醇-水（7:3，v/v）混合溶液，超声提取20分钟（功率300W，温度30℃），使防腐剂充分溶出。提取液经4000rpm离心10分钟，取上清液过0.22μm有机滤膜，待测。若样品基质复杂（如含大量油脂），可采用固相萃取净化：取10mL滤液上样至OasisHLB固相萃取柱（500mg/6mL），依次用5mL水和5mL甲醇洗脱，收集洗脱液氮吹至近干，用初始流动相定容至10mL。  

2.色谱条件  

色谱柱选用AgilentZORBAXSB-C18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相A为0.1%磷酸水溶液，流动相B为乙腈；梯度洗脱程序：0-5min，10%B；5-15min，10%B→90%B；15-20min，90%B；20-20.1min，90%B→10%B；20.1-25min，10%B。流速1.0mL/min，柱温30℃，检测波长254nm，进样量10μL。  

3.标准曲线制备与定量  

配制防腐剂混合标准溶液系列，浓度分别为0.01mg/L、0.05mg/L、0.1mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L，在上述色谱条件下进样分析，以浓度为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线，计算回归方程和相关系数（R²）。样品中防腐剂浓度按公式计算：防腐剂含量（mg/kg）=（由标准曲线得到的浓度×定容体积×稀释倍数）/样品质量。  

三、方法验证与质量控制  

1.方法学参数  

线性范围：0.01-1.0mg/L范围内，苯氧乙醇、山梨酸钾等防腐剂的相关系数R²均大于0.999；检出限（LOD）为0.005mg/kg（S/N=3），定量限（LOQ）为0.015mg/kg（S/N=10）。精密度试验：对0.1mg/L标准溶液平行测定6次，相对标准偏差（RSD）≤4.5%。加标回收率：在低（0.02mg/kg）、中（0.1mg/kg）、高（0.5mg/kg）三个水平下，加标回收率为82%-118%，满足检测要求。  

2.干扰消除  

样品基质中的表面活性剂可能干扰防腐剂分离，通过优化流动相pH值（调节至2.5）和梯度洗脱程序，实现目标物与基质峰的基线分离；对于含油脂样品，固相萃取净化可有效去除脂溶性杂质，降低基质效应。  

四、实际样品分析  

应用建立的方法对30批市售宠物清洁护理剂进行检测，包括犬用沐浴露（15批）、宠物湿巾（10批）、护毛素（5批）。结果显示：12批样品检出苯氧乙醇（含量0.02%-0.08%），8批检出山梨酸钾（0.01%-0.05%），均未超出GB/T34857-2017《化妆品安全技术规范》中防腐剂限liang要求（苯氧乙醇≤1.0%，山梨酸钾≤0.6%）；2批样品检出甲基异噻唑啉酮（MIT），含量0.001%-0.002%，符合宠物产品添加限值。  

五、结论  

本方法通过优化样品前处理和色谱条件，可快速准确测定宠物清洁护理剂中多种防腐剂含量，具有操作简便、灵敏度高、重现性好的特点。该方法适用于宠物清洁产品的日常质量监控，为保障宠物用产品安全提供了技术支持。